在寫作中，一篇由Bigger等發(fā)表于1927年的最新金葡菌（醫(yī)院內(nèi)導(dǎo)致交叉感染的主要致病菌）變異的研究文獻(xiàn)，引起了弗萊明的關(guān)注。

文獻(xiàn)稱，金葡菌在瓊脂糖平板培養(yǎng)基上，經(jīng)歷約52天長時(shí)期室溫培養(yǎng)后，會(huì)得到多種變異菌落，甚至有白色菌落。出于對該文的疑慮或者其它原因，弗萊明決定重復(fù)該文的發(fā)現(xiàn)。

1928年初，他讓助手普利斯著手重復(fù)該項(xiàng)發(fā)現(xiàn)，但普利斯不愿繼續(xù)做細(xì)菌學(xué)研究，而轉(zhuǎn)做病理學(xué)研究。于是，弗萊明只有自己動(dòng)手。

就這樣從年初到七月，弗萊明一直在重復(fù)研究Bigger等的發(fā)現(xiàn)，同時(shí)也養(yǎng)成了一個(gè)習(xí)慣，既便那些，本不是為了觀察變異菌落所做的正常培養(yǎng)基，也在清洗之前，先在室溫下放置較長時(shí)間，做最后一次觀察——試圖以此發(fā)現(xiàn)新的變異菌落——再進(jìn)行清洗，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基邊緣有一塊因溶菌而顯示的慘白色，因此發(fā)現(xiàn)青霉素，并于1929年6月發(fā)表《關(guān)于霉菌培養(yǎng)的殺菌作用》，最終使其獲諾貝爾獎(jiǎng)的論文。

五、29-39

在這十年中，弗萊明只發(fā)了兩篇有關(guān)青霉素的研究論文。但他的實(shí)驗(yàn)記錄卻顯示，在這十年中，弗萊明并未完全停止青霉素的研究。事實(shí)上，他做過青霉素粗提物的家兔以及小白鼠靜脈注射研究。

但在用天竺鼠做口服實(shí)驗(yàn)時(shí)，出現(xiàn)了極高的致死率，現(xiàn) 在知道這是腸道正常菌叢被殺死所致。這可能打擊了弗萊明的信心，畢竟這世界上很多早期發(fā)現(xiàn)的抗菌素，最后發(fā)現(xiàn)沒有什么治療用價(jià)值。