弗朗索瓦一世率重兵越過(guò)阿爾卑斯山脈占領(lǐng)了米蘭，爾后逼近帕維亞。帕維亞戰(zhàn)役法軍失敗，弗朗索瓦一世被俘。然而他獲釋后拒不承認(rèn)1526年在馬德里簽訂的條約，并加入在英格蘭支持下由教宗建立的、旨在使意大利擺脫西班牙桎梏的同盟(科尼亞克同盟，1526年5月)。參加同盟的還有威尼斯、米蘭、佛羅倫薩。

1527年，意大利戰(zhàn)爭(zhēng)再度爆發(fā)。雙方各有勝負(fù)，1529年法國(guó)戰(zhàn)敗，被迫于1529年8月與神圣羅馬帝國(guó)簽訂和約并放棄對(duì)意大利的爭(zhēng)奪。然而弗朗索瓦一世于1536年再度挑起戰(zhàn)爭(zhēng)，占領(lǐng)皮埃蒙特和薩伏依。

1538年，法國(guó)和神圣羅馬帝國(guó)在尼斯簽訂為期10年的停戰(zhàn)協(xié)定。但法國(guó)出使土耳其蘇丹的兩位使者在米蘭公國(guó)境內(nèi)被殺，成為1542—1544年戰(zhàn)爭(zhēng)的導(dǎo)火索。

哈布斯堡王朝的查理五世與英格蘭的亨利八世結(jié)成同盟，法國(guó)的盟國(guó)則包括丹麥、瑞典。雖然天主教國(guó)家被規(guī)定禁止與穆斯林結(jié)盟，法國(guó)仍與奧斯曼帝國(guó)達(dá)成了秘密同盟，并在1543年于尼斯發(fā)動(dòng)聯(lián)合登陸戰(zhàn)。

1544年，法軍在圍攻卡里尼亞諾要塞(都靈以南)期間，在切雷索萊附近取得了輝煌勝利。然而，由于哈布斯堡家族和英格蘭軍隊(duì)攻入法國(guó)境內(nèi)，法國(guó)被迫于1544年9月在克雷普簽訂了重申1529年康布雷條約基本條款的和約。

1551年再度爆發(fā)的意大利戰(zhàn)爭(zhēng)一直延續(xù)到1559年，法西兩國(guó)被迫簽訂了卡托—康布雷西和約(1559)。這一和約結(jié)束了法國(guó)對(duì)意大利的擴(kuò)張，鞏固了西班牙在米蘭公國(guó)、那不勒斯王國(guó)、西西里島和撒丁島的統(tǒng)治地位，并使意大利仍處于政治上分裂的局面。